首先，我們來(lái)說(shuō)說(shuō)凍冷技術(shù)的發(fā)展。

　　為了提升卵子、胚胎解凍的存活率，冷凍技術(shù)已由過(guò)去的“慢速冷凍” (slow freezing)演進(jìn)到現(xiàn)在的“玻璃化冷凍”(vitrification)。

　　慢速冷凍

　　利用低濃度的冷凍保護(hù)劑處理胚胎，逐步降低溫度后，再將胚胎保存在零下196℃的液態(tài)氮中。這種冷凍方式，細(xì)胞內(nèi)的水會(huì)形成結(jié)晶，并損傷細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器，而體積增大甚至可能直接把細(xì)胞膜脹破，直接宣告生殖細(xì)胞死亡。

　　玻璃化冷凍

　　玻璃化冷凍法的基本原理是將高濃度的冷凍保護(hù)劑在超低溫環(huán)境下凝固，形成不規(guī)則的玻璃化樣固體，保存了液態(tài)時(shí)正常分子和離子分布，因而在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生玻璃化時(shí)能起到保護(hù)作用。所保存細(xì)胞在冷凍保護(hù)液中脫水到一定程度后，則引起內(nèi)源性胞質(zhì)大分子如蛋白質(zhì)及滲透到胞內(nèi)的冷凍保護(hù)劑濃縮，從而使細(xì)胞在劇烈的快速降溫中得到保護(hù)。

　　玻璃化冷凍技術(shù)的特色就是使細(xì)胞本身及冷凍溶液在冷凍時(shí)，呈現(xiàn)黏稠而不產(chǎn)生結(jié)晶的玻璃化狀態(tài)，利用這種不結(jié)冰的原理以改善慢速冷凍之缺點(diǎn)。

　　玻璃化冷凍過(guò)程中會(huì)受到諸多因素影響：冷凍保護(hù)劑的類(lèi)型和濃度、玻璃化冷凍液的作用溫度、細(xì)胞與投入液氮前與保護(hù)劑的接觸時(shí)間、冷凍過(guò)程中的承載工具、細(xì)胞的發(fā)育階段和質(zhì)量等。

　　第二，我們要明確凍卵和凍胚的定義。

　　凍卵

　　卵子是人類(lèi)最大的細(xì)胞，含有大量的水分，它在失水后會(huì)變形，解凍后又由皺縮的形態(tài)恢復(fù)飽滿。卵子冷凍不同于我們平時(shí)用冰箱冷凍食品，我們用的是液氮保存卵子，保存的溫度為零下196攝氏度。手術(shù)取出的卵子異常嬌弱且“壽命”有限，更別說(shuō)如此快速的降溫，因此，卵子冷凍難度遠(yuǎn)大于胚胎冷凍，復(fù)蘇率仍較低。學(xué)者們通過(guò)長(zhǎng)期的實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，玻璃化冷凍技術(shù)相較于以往的冷凍技術(shù)能夠取得較為理想的卵子復(fù)蘇率，臨床上，可作為冷凍卵子的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行推廣。

　　凍卵是女性保護(hù)生育力一種方法，但不能承諾一定成功，必須強(qiáng)調(diào)該領(lǐng)域的很多方面還處于試驗(yàn)階段。同時(shí)這一新的技術(shù)還引發(fā)了很多倫理問(wèn)題，涉及卵子的收集以及將來(lái)配子的使用方面。所以，有關(guān)部門(mén)和醫(yī)學(xué)專(zhuān)家不建議單純借助冷凍卵子措施來(lái)人為地推遲生育年齡。

　　但是，凍卵生育力保存對(duì)于腫瘤患者更有意義。當(dāng)今有效的腫瘤治療方法可以使癌癥患者的生存率大幅度地增加，尤其是對(duì)不同類(lèi)型的白血病、乳腺癌患者來(lái)說(shuō)，其存活率在70%以上。腫瘤發(fā)病率和患者生存率的增加使得癌癥患者的生育要求凸顯出來(lái)。

　　作為治療腫瘤的手段，手術(shù)、化療和放療引起的不良反應(yīng)，可能或多或少會(huì)對(duì)卵巢功能及生育能力造成難以逆轉(zhuǎn)的損傷，包括卵巢功能下降，甚至是卵巢早衰，導(dǎo)致終身不孕不育。年輕的女性腫瘤康復(fù)患者雖然挽回了自己的生命，卻常常失去孕育自己下一代的機(jī)會(huì)，而且機(jī)體衰老加速，面臨著與絕經(jīng)后婦女同樣的健康挑戰(zhàn)。

　　為此，對(duì)年輕腫瘤患者來(lái)說(shuō)，在實(shí)施化療和放療之前，進(jìn)行有效和安全的生育力保存，是世界各國(guó)醫(yī)療健康事業(yè)的重要發(fā)展，在許多國(guó)家已經(jīng)作為腫瘤治療前的常規(guī)咨詢項(xiàng)目，然而，我國(guó)還未常規(guī)進(jìn)行。

　　凍胚

　　胚胎冷凍技術(shù)是目前保存生育功能較為成熟的方法，其通過(guò)將胚胎和凍存液一同裝入冷凍管中，采用程序化冷凍或者玻璃化冷凍技術(shù)使胚胎處于“冬眠”狀態(tài)，在零下196℃液氮環(huán)境中長(zhǎng)期保存。

　　一般情況下，若在一個(gè)試管嬰兒周期中得到多個(gè)高質(zhì)量胚胎，移植1-2個(gè)胚胎后，可將剩余的胚胎凍存;而對(duì)于不宜在當(dāng)次治療周期進(jìn)行新鮮胚胎移植的患者，可將獲得的全部胚胎進(jìn)行冷凍保存，待日后再行胚胎復(fù)蘇移植，即凍融胚胎移植。

　　胚胎冷凍的優(yōu)點(diǎn)

　　（1）可以保存體外受精移植后的剩余胚胎。

　　（2）減少多胞胎發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

　?。?）降低卵巢過(guò)度刺激綜合癥（OHSS）。

　?。?）等待植入前遺傳學(xué)診斷和篩查（PGD/PGS）的結(jié)果。

　　第三，凍卵≠凍胚。

　　雖然，凍卵也是在相同的條件下進(jìn)行保存，但凍卵保存的是未經(jīng)過(guò)授精的卵子，而凍胚保存的卻是經(jīng)過(guò)授精培養(yǎng)后的胚胎，所以二者并不是完全相同的。

　　相比冷凍胚胎，冷凍卵子對(duì)技術(shù)有更高要求。卵子作為人體最大的細(xì)胞，含有大量的水分。不管是使用慢速冷凍還是采用超高速的玻璃化冷凍，冷凍前的脫水就顯得極其重要。

　　其次，卵子細(xì)胞膜對(duì)溫度變化的耐受能力和通透性都比較差，這些都會(huì)讓細(xì)胞保護(hù)劑滲入較困難。脫水不充分的話，在降溫過(guò)程中就易形成冰晶，損傷細(xì)胞膜和細(xì)胞器導(dǎo)致存活率降低。細(xì)胞保護(hù)劑同時(shí)又具有細(xì)胞毒性，高溫長(zhǎng)時(shí)間接觸同樣可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

　　所以， 冷凍卵子的保護(hù)劑的成分、配比，解凍后受精的時(shí)機(jī)，對(duì)冷凍卵子的冷凍、復(fù)蘇、受精和之后的發(fā)育，都是很重要的，因此，凍卵對(duì)于實(shí)驗(yàn)室技術(shù)與實(shí)驗(yàn)人員的資歷有非常高的要求。

　　 生殖醫(yī)學(xué)中心